moc1/moc2小鼠

細(xì)胞品系 : C57BL/6 Cxcr3-/-

細(xì)胞來源 : 國外

細(xì)胞鑒定 : STR鑒定已通過

細(xì)胞形態(tài) : 淋巴母多角形細(xì)胞樣,貼壁+懸浮生長

培 養(yǎng) 基 : DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)(BasMed-AW-013)+FBS 10% + P/S1%500ML培養(yǎng)基：IMDM:F10/F12=2:1313ml:157ml培養(yǎng)基+FBS10%(50ml）+2.5mg/500ml胰島素+20ug/500ml+2.5ug/500ml EGF+ P/S  1% 雙抗，1%。

培養(yǎng)條件 :  氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

貼壁細(xì)胞

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％(w / v） EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分

變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培養(yǎng)皿中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的以保持細(xì)胞的

生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

4. 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

5. 運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的來培養(yǎng)細(xì)胞。

細(xì)胞用途 : 僅供科研使用

注意事項

1. 建議加入0.25%EDTA的去后充分混勻所有細(xì)胞都接觸到，放置到培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，時長大約是3-4分鐘左右后拿出來

2. 在培養(yǎng)器皿的側(cè)邊進(jìn)行拍打幫助細(xì)胞脫落，拍打過程大約持續(xù)2分鐘左右才會脫落大部分細(xì)胞，如果脫落比例還不是很多，也可以重新放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化1-2分鐘后再次拿出來進(jìn)行拍打脫落，等80-90%細(xì)胞都脫落后再終止消化，離心重懸再重新鋪瓶，分散均勻。

3. MOC2細(xì)胞貼壁性和常規(guī)細(xì)胞類似沒有特別牢固。倍增周期也沒有MOC1快。采用常規(guī)消化方法處理。

常溫發(fā)貨

收到后T25瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置2-3小時后觀察密度和狀態(tài)拍照2-3張反饋給銷售，密度達(dá)標(biāo)就可以傳代。前期傳代比例1:2，等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成1個1ml凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代，反復(fù)凍存2-3只后才擴(kuò)增做實驗，以防突發(fā)情況引起斷種。

干冰發(fā)貨

常規(guī)細(xì)胞發(fā)貨凍存管2只，復(fù)蘇1只，另外一只備用，均沒有復(fù)蘇成功的情況即時留存復(fù)蘇照片通知我們。

生物安全

1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

懸浮細(xì)胞

懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在

1×10?~1×10?個/mL

(不同細(xì)胞對密度要求不同）可以維持細(xì)胞的正常生長。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:4的比例進(jìn)行。